En termisk syklus er et laboratorieutstyr som gjør det mulig å utføre polymerasekjedereaksjonen (PCR) effektivt og raskt, ved hjelp av automatisk og syklisk realisering av temperaturendringene som kreves for amplifisering av en kjede. deoksyribonukleinsyre (DNA), fra et termostabilt enzym. PCR gjør at et lite antall DNA-molekyler kan amplifiseres mange ganger, eksponentielt.
Protokollen for denne teknikken er basert på å syntetisere et DNA-fragment mange ganger ved hjelp av et polymeraseenzym som kan fungere ved svært høye temperaturer, siden det kommer fra Thermus aquaticus-bakteriene som lever ved høye temperaturer (79 ° C til 85 ° C), kjent som taq polymerase.
Når vi gjør en PCR-reaksjon, simulerer vi hva som skjer inne i cellen når DNA syntetiseres og alle nødvendige ingredienser for å gjøre det blandes i røret: polymerase, DNAet til organismen vi ønsker å studere, oligonukleotider (primere, initiatorer, primere) som er nødvendige for at transkripsjonen skal starte, dinukleotider (dNTP) og betingelsene for at enzymet skal fungere ordentlig (viss pH, visse mengder magnesium i form av MgCl2, KCl og andre salter eller reagenser kan være nødvendig, avhengig av hver polymerase). Denne teknikken har mange forskjellige anvendelser og har blitt et svært viktig verktøy innen molekylærbiologi; Dens anvendelser spenner fra populasjonsgenetikk, molekylær og genomisk evolusjon til rettsmedisin.
Hvordan fungerer PCR-teknikken?
Hvis vi allerede har rørene med alt nødvendig for at syntesen av fragmentet som interesserer oss skal utføres (taq polymerase, dinukleotider, DNA, vann, buffer med magnesium og andre salter, og oligonukleotider). Det neste trinnet er å sette rørene i den termiske sykluseren, som i utgangspunktet tjener til å varme eller avkjøle dem til svært presise temperaturer.
Hvordan kan det ha seg at DNA-fragmentet vi ønsker forsterkes?
Den termiske syklusen varmer eller avkjøler rørene til tre forskjellige temperaturer, som gjentas om og om igjen (kjent som reaksjonssykluser), den første er ved 95 ° C (denaturering) hvor de doble DNA-trådene åpnes eller denatureres, og gjenstår i form av enkle kjeder; Etter at den termiske syklusen justerer temperaturen i et intervall mellom 40 ° C og 60 ° C (justering), ved denne temperaturen dannes og brytes hydrogenbindingene mellom oligonukleotidene og DNA konstant, og de mer stabile bindingene (de som er komplementære ) vil vare lenger, og etterlate oligonukleotidene "justert" og danner en liten dobbelttrådet region. Polymerasen binder seg til dette lille stykket dobbelttrådet DNA).
Polymerasen binder seg til dette lille stykket av dobbelttrådet DNA og begynner å kopiere i 5 'til 3'-retningen; Ved å legge til noen flere baser stabiliserer hydrogenbindingene som dannes mellom basene bindingen ytterligere, og oligonukleotidet forblir på dette stedet for neste trinn. Etterpå stiger temperaturen til 72 ° C (et trinn kjent som forlengelse), siden 72 ° C er temperaturen der polymerasen når sin maksimale aktivitet, og syntesen av DNA-fragmentene fortsetter fra oligonukleotidene som de allerede hadde stilt opp. .
At Kalstein vi er PRODUSENTER og vi tilbyr deg et utmerket utvalg av termiske syklere til de beste PRISER. Derfor inviterer vi deg til å ta en titt på våre tilgjengelige termiske syklere: HER
