Gelelektroforese er en laboratorieteknikk som brukes i genetikk for å skille blandinger som inneholder DNA, RNA og andre proteiner i henhold til deres respektive molekylstørrelse og ladning. DNA, RNA eller proteiner som må separeres i denne metoden kjøres gjennom en gel som inneholder små porer. Molekylene drives gjennom gelen av et elektrisk felt.
Horisontal gelelektroforese
Horisontal gelelektroforese bruker den grunnleggende teorien for separasjon av DNA, RNA eller proteinmolekyler i henhold til deres respektive molekylstørrelse og ladning. I denne teknikken er gelen tilstede i en horisontal orientering og er nedsenket i en buffer som er kontinuerlig. Agarosegelen brukes til å skille gelboksen i to rom. Den ene enden av gelboksen inneholder en anode, mens den andre enden inneholder en katode. Når en strøm påføres, tillater bufferen som brukes i denne teknikken opprettelsen av en ladningsgradient. Når belastningen påføres, har gelen en tendens til å varmes opp.
Bufferen fungerer også som kjølevæske, og holder temperaturen på optimale nivåer. Resirkulering av løpebufferen forhindrer dannelsen av en pH-gradient. Et diskontinuerlig buffersystem kan ikke brukes i horisontal gelelektroforese da de to avdelingene i gelsystemet kobles til løpebufferen.
Ved horisontal gelelektroforese kan ikke akrylamid brukes da gelboksen er utsatt for oksygen. På grunn av tilstedeværelsen av oksygen hemmes akrylamidpolymerisasjonen, noe som forstyrrer geldannelsen. Horisontal gelelektroforese er en uanstrengt metode som brukes til å separere DNA og RNA.
Vertikal gelelektroforeses
Den vertikale gelelektroforeseteknikken fungerer i henhold til den primære teorien om gelelektroforese, men anses å være mer kompleks enn den horisontale gelelektroforesemetoden. Denne teknikken bruker en diskontinuerlig buffer. En katode er plassert i det øvre kammeret, og anoden er plassert i det nedre kammeret. Elektrodene i hvert rom gir det nødvendige elektriske feltet. Et tynt lag gel helles mellom de to monterte glassplatene. Derfor er den øvre delen av gelen nedsenket i det øvre kammeret, og den nedre delen av gelen er nedsenket i det nedre kammeret. Når strømmen er påført, beveger en liten del av bufferen seg til det nedre kammeret fra det øvre kammeret gjennom gelen.
Ved vertikal gelelektroforese flyter bufferen bare gjennom gelen. Dette tillater presis kontroll av spenningsgradienten under separasjonstrinnet. Akrylamidgel kan brukes da rommene ikke utsettes for atmosfærisk oksygen. På grunn av den mindre porestørrelsen til akrylamidgelen, kan presis separasjon oppnås med høyere oppløsning.
At Kalstein vi er PRODUSENTER, så du kan KJØPE utmerkede elektroforesesystemer til laboratoriet ditt til utmerkede PRISER. Derfor inviterer vi deg til å ta en titt på utstyret vårt som er tilgjengelig på produktene HER.
